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倒平板技巧分享

日期:2024-09-13     来源:    
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                                                                  倒平板

倒平板在生物实验中是一个至关重要的环节,广泛应用于细菌培养、分子生物学实验的日常操作中。无论是在环境监测、水质监测,还是微生物检查中,准确有效地倒平板都是获得实验成功的前提。然而,初学者往往在这一过程中面临诸多挑战。为此,本文将总结几点小技巧,以帮助初学者提升倒平板供大家参考:

 

 

一、培养基温度确定:
1.标准要求:熔化后的培养基放入47 ℃~50 ℃的恒温装置中冷却保温(可根据实际培养基凝固温度适当提高恒温装置温度),直至使用,培养基达到47 ℃~50℃的时间与培养基的品种、体积和数量有关。(GB 4789.28-2024)
2.固体培养基倾注的温度在45℃-50℃,怎么确定?
技巧:用手心轻轻碰一下盛固体培养基的三角瓶,感觉不烫,然后用手背也感觉一下,感觉烫手,这时的温度大概是50℃。(口诀:手心不烫手背烫)。
3.为什么要确定培养基温度?
温度过高,培养基凝固时间过长,培养皿皿盖上会出现大量冷凝水,不利于后续实验。对于需要添加不耐热的抗生素等试剂的培养基,温度过高,试剂容易失效。

 


二、防止培养皿中有冷凝水:


1、待固体培养基降低温度至45℃-50℃,开始倒平板,此时水蒸气蒸发速度减慢,皿盖产生的水就少。

2、即使温度至45℃-50℃,培养皿盖还是有水蒸气、还是会有水珠,怎么办?倒平板的时候把皿盖打开,待全部倒完后,超净台里凝固5min后,关闭皿盖,倒置放置,备用。(不严谨)

3、在倒培养基时,可以一个垒一个,静置直到全部培养皿凝固,倒置备用。这种方法,除了最上面的皿盖有水蒸气,其余皿盖都不会有水蒸气产生。(专家不建议这样操作)


三、预防培养基气泡形成


(1)灭菌之前,琼脂粉要充分溶解。

(2)灭菌后待温度降至50-60℃,轻轻沿壁摇匀,让培养基整体沿着同一个方向摇起来,直到摇匀为止。

(3)灭菌之后,需要添加抗生素等试剂的培养基待温度降至45-50℃,再加入抗生素等试剂,轻轻沿壁摇匀,让培养基整体沿着同一个方向摇起来,直到摇匀为止。

(4)已经产生好多气泡,又消不掉的培养基,用微波炉等加热设备重新加热一下,温度高了气泡也就从培养基中跑出来啦。

四、倒平皿保持均一性:
倾注平皿要左三圈,右三圈的晃动,注意不要把平皿盖沾上,并且要轻轻晃动。

五、具体对待:
前面几点讲了倒平皿的最适温度保持在45-50度,但不同品牌的琼脂质量不一样,同样按照国标中的配方琼脂含量1.5%, 有些琼脂凝固很快,有些凝固慢一些,还有环境温度偏低,琼脂凝固也会快一些,要根据实际情况,适当调整琼脂的含量,在室温较低时我们所配的培养基琼脂 用量就偏少一些,还有在倒平板和混匀时动作要快一些,室温实在太低,也可以把培养皿放到烘箱中适当加热一下(40度左右)。


六、培养基厚度:
1.倾注熔化的培养基至平皿中(直径90 mm的平皿﹐通常要加入15 mL ~20 ml.琼脂培养基),使之在平皿中的厚度至少为3 mm。如果平板需贮存,或者培养时间超过48 h或培养温度高于40 ℃,则需要倾注更多的培养基(GB4789.28-2024)。

但是具体操作如何把握,这是个难题?

技巧:倒平板的时候,铺满整个培养皿底部,稍微再倒一点点就是20mL,再稍微多倒一点点就是25mL,这个需要经验,多倒几次就能把握。

 
 
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